為進一步做好非洲豬瘟防控工作，落實《農業農村部畜牧獸醫局關于做好非洲豬瘟新型基因缺失毒株防控工作的通知》（農牧便函〔2022〕438號）要求，防范非洲豬瘟國外I177L基因缺失疫苗（以下簡稱“基因缺失疫苗”）流入我省，確保全省生豬產業穩定發展，現就有關事項通知如下。
一、嚴防國外疫苗毒株流入我省
各市要密切配合海關等部門，加大監管查處力度，嚴防國外基因缺失疫苗、生豬及生豬產品非法進入我省。進一步加強疫苗銷售使用監管，強化生豬及生豬產品調運監管，加強對廣西、云南等邊境省份調入我省的生豬及生豬產品的查驗力度，如發現基因缺失疫苗或未附具動物檢疫合格證明（動物衛生證書）的生豬及生豬產品，要做好溯源和查處工作；有證據證明是境外輸入的，應依法依規移交海關、公安等部門處理。
二、加強疫苗毒株專項監測流調
繼續做好非洲豬瘟監測工作，落實《山西省2022年規模養殖場等場所非洲豬瘟監測實施方案》安排部署，按照時間節點要求做好規模豬場及其周邊屠宰場、無害化處理場、生豬運輸車輛等重點場所采樣監測工作，對于實驗室檢測過程中發現的陽性樣品及時送省動物疫病預防控制中心，按照“非洲豬瘟病毒I177L基因缺失毒株鑒別檢測規范”（見附件）進行鑒別檢測。
三、組織做好宣傳解讀工作
各市要適時組織相關科研院校、養殖企業的專家和技術人員，通過現場培訓、自媒體等多種方式，科學、客觀介紹基因缺失疫苗試驗數據情況，普及基因缺失疫苗對種母豬和仔豬的危害知識，幫助廣大養殖場認清基因缺失疫苗對生豬生產的影響。同時，要加強非洲豬瘟科學防控知識宣傳，督促指導養殖場戶增強自主防范意識，采取生物安全防控措施，積極營造群防群控的良好局面。
四、嚴格執行非洲豬瘟疫苗＂五禁止＂監管措施
各市要繼續嚴格執行非洲豬瘟疫苗“五禁止”監管措施，禁止未經批準開展實驗活動，禁止未經審批開展臨床試驗，禁止生產非法疫苗，禁止經營非法疫苗，禁止使用非法疫苗。要進一步加大對非洲豬瘟疫苗相關違法行為查處力度，發現違法制售非洲豬瘟疫苗、違法經營所謂“非洲豬瘟中試苗、自家苗”或走私苗等非法疫苗、違法接種使用非法疫苗的，要依照《獸藥管理條例》和《獸藥嚴重違法行為從重處罰情形》有關規定從嚴從快從重處理。涉嫌犯罪的，及時依法移送公安機關追究刑事責任。對養殖場戶使用非法疫苗免疫接種的豬只，一經檢測為陽性，視為非洲豬瘟感染豬，予以撲殺，并不得給予補助。
附件
非洲豬瘟病毒I177L基因缺失毒株鑒別檢測規范
本規范適用于非洲豬瘟病毒I177L基因缺失毒株的熒光PCR檢測。
1 主要試劑
1.1 病毒DNA提取試劑盒。
1.2 無核酸酶的水。
1.3 探針法熒光PCR預混液。
1.4 引物和探針:P72和I177L基因擴增引物和探針，均由國家非洲豬瘟參考實驗室設計、提供。
1.5 陽性和陰性對照:每次熒光PCR檢測，應加陽性對照、陰性對照。陽性對照為ASFV基因組DNA標準物質。陰性對照用水替代樣品DNA。
2 主要儀器設備
2.1 熒光PCR儀。
2.2 臺式低溫高速離心機。
2.3 組織勻漿儀。
2.4 全自動核酸提取儀。
2.5 微量可調移液器。
2.6 無核酸酶的離心管、PCR管和吸頭。
3 樣品采集和運輸保存
在活體檢查時，可采集豬的抗凝全血(EDTA抗凝)、口鼻拭子或者血清等；病死豬可采集脾臟、淋巴結、扁桃體、肝臟等組織病料。盡快送至實驗室進行病毒核酸檢測。
樣品的采集、運送與保存應滿足NY/T 541《獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范》的相關要求。樣品可在4℃最長保存2天，長時間保存應在-20℃以下冷凍保存。
4 樣品處理
4.1 組織樣品取0.1g-0.2g組織樣品切成小碎塊，加入lmL-2mL預冷的PBS緩沖液(pH7.4)用組織勻漿儀高速勻漿，制成10%組織勻漿液，5000r/min離心10min，取200μL清液進行核酸提取。
4.2 液體樣品抗凝全血、血清等液體樣品,直接取200μL提取核酸。
5 病毒核酸提取采用病毒DNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀提取病毒核酸。提取后的核酸溶液應立即使用或置于-20℃以下冷凍保存(6個月內使用)。
6 熒光PCR檢測
6.1 熒光PCR反應液制備在無核酸酶的離心管中制備熒光PCR反應混合液，組成包括：P72基因和I177L基因探針預混液、2×探針法熒光PCR預混液和無核酸酶的水。反應體系配制見下表。
表1 每個反應體系配置
6.2 熒光PCR擴增條件50℃2分鐘；95℃5分鐘；95℃15秒，60℃1分鐘，40個循環，在每一循環的60℃時收集FAM和VIC熒光信號。
6.3 結果分析Ct值由熒光PCR儀軟件自動確定。
6.3.1試驗成立條件陽性對照中P72和I177L基因的Ct值均應<35且出現特異性擴增曲線，陰性對照的P72和I177L基因均應無Ct值或Ct值≥40且無特異性擴增曲線。同時滿足上述條件時試驗結果有效，否則應重新進行試驗。
6.3.2 檢測結果判定FAM通道對應P72基因，VIC通道對應I177L基因。被檢樣品Ct值≤38且出現特異性擴增曲線時，判為目標基因陽性；無Ct值或Ct值≥40時，判為目標基因陰性；38<Ct值<40且出現特異性擴增曲線時，判為疑似。對疑似樣品,再進行1次復檢，做3個重復；有2個重復Ct值<40且出現特異性擴增曲線時，判為目標基因陽性，否則判為目標基因陰性。
6.3.3 綜合判定最終判定應結合P72和I177L兩個基因的檢測結果進行綜合分析,具體判定標準見表2。
表2 綜合判定標準
注: “+”代表陽性；“-”代表陰性。
山西省農業農村廳辦公室
2022年6月23日
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